- popis materijala
- Dobivanje i priprema sjemena iz sjemenske mahune - ovako ćete to učiniti ispravno
- Nanesite sjemenke na hranjivi medij
Uspješna sjetva sjemena orhideja zahtijeva preispitivanje od hobi vrtlara. Da bi orhideja uopće proizvela sjemensku mahunu, mora se oprašiti ručno. Za razliku od drugih biljnih sjemenki, sjemenke koje sadrže nemaju hranjivo tkivo, već su ovise o gljivici simbioze. Stoga je razvijena posebna in vitro metoda kako bi sjeme i dalje klijalo, a medij za uzgoj zamijenio je mikoriznu gljivu. Ovdje objašnjavamo kako točno funkcionira postupak.

popis materijala
Sljedeća oprema i potrošni materijal nalaze se pri ruci u blizini kuhinjskog štednjaka:
- posuda za kuhanje
- špiritus plamenika
- rešetka
- Male staklenke s navojnim vrhom
- Epruvete s gotovim podlogom za kulturu
- pinceta
- inokulacijske petlje
- klamerica
- Oštar nož ili skalpel
- rukavice
- filter za kavu
- pamučni jastučići
- Destilirana voda
- Etanol (70 posto)
- vodikov peroksid (3 posto)
Vodikov peroksid se koristi za dezinfekciju i dostupan je u ljekarnama i online trgovinama u 3-postotnom razrjeđenju spremnom za uporabu. Ovdje možete pročitati kako je lako pripremiti medij za kulturu.
Dobivanje i priprema sjemena iz sjemenske mahune - ovako ćete to učiniti ispravno
Ako je ručno oprašivanje bilo uspješno, pričekajte dok se sjemenka mahuna ne otvori. Odrežite ih, istresite sjemenke na filter papir za kavu i oblikujte ih u omotnicu, zatvorenu iglama za šivanje. Prije sjetve na medij kulture, sjeme se mora sterilizirati. Tako to ide:
- U lonac ulijte vodu do visine 3 cm i zakuhajte
- Očistite rešetku etanolom i stavite je na lonac
- Napunite staklenku s navojem visine oko 1 cm vodikovim peroksidom
Pincetom stavite omotnicu sa sjemenkama u otopinu na 10 minuta. Ponovljeno bacanje osigurava da su sve sjemenke navlažene.
Nanesite sjemenke na hranjivi medij
Sljedeće operacije se izvode preko konstantne struje pare simulirajući uvjete sterilnog radnog stola. Prati ove korake:
- Na rešetku stavite vatu namočenu u etanol i čašu destilirane vode
- Upotrijebite pincetu da uklonite omotnicu sjemena iz čaše u mlazu pare i stavite je u destiliranu vodu
- Zavrtite omotnicu sjemena u vodi i stavite je na pamučni jastučić kako biste je otvorili pincetom i skalpelom
- Uzmite epruvetu s podlogom za kulturu, otvorite je u mlazu pare i stavite je na krpu natopljenu etanolom
Uz pomoć inokulacijske petlje, sjeme iz omotnice donosite izravno na medij kulture i tamo ga distribuirate. Zatim ponovno zatvorite epruvetu čepom i stavite čep od aluminijske folije, idealno zatvoren gumenim prstenom. Važno je napomenuti da alat čistite etanolom prije i nakon svakog radnog koraka ili ga kratko zapalite iznad alkoholnog plamenika.
savjeti
Nakon sjetve posude za kulturu stavite na toplo 25 stupnjeva Celzija na svijetlo mjesto bez izravnog sunca. Ne smije biti jakih temperaturnih fluktuacija koje bi mogle izazvati promjenu tlaka u epruvetama.